Bactéries intracellulaires dans la pathogenèse de l’infection urinaire d’Escherichia coli chez les enfants

Contexte Urétogène Escherichia coli L’UPEC est l’agent le plus commun des infections urinaires UTI Le modèle classique de la pathogenèse propose l’ascension de l’UPEC par l’urètre et l’adhésion externe à l’urothélium Récemment, la capacité d’UPEC à envahir les cellules urothéliales et à former des communautés bactériennes intracellulaires L’objectif de la présente étude était de déterminer la présence de bactéries intracellulaires IB chez les enfants atteints d’une infection urinaire causée par E. coli et de caractériser ses attributs de virulence et sa relation avec les résultats cliniques Cent trente-trois enfants atteints d’E. Les échantillons d’urine ont été analysés par microscopie optique et confocale à la recherche de cellules urothéliales exfoliées avec IB Groupe phylogénétique et les facteurs de virulence de l’UPEC ont été déterminés en utilisant une réaction en chaîne par polymérase multiplex Les dossiers médicaux ont été analysésRésultats La présence de IB a été detec % de ces cas ont pu être détectés par microscopie optique. Soixante-quatorze dossiers médicaux ont été analysés, avec IBC / IIB, sans IB. Aucun gène de virulence. était associé à IBC / IIB La présence de IBC / IIB était associée à un rapport de cotes UTI récurrent [OR],; % intervalle de confiance [CI], -; P =, en particulier chez les enfants sans anomalies fonctionnelles ou morphologiques des voies urinaires. % CI, -; P = les GRV étaient associés au syndrome des voies urinaires inférieures. % CI, -; P = et l’absence de fièvre P = Conclusions Les IBC / IIB pourraient expliquer une forte proportion d’enfants ayant des infections urinaires récurrentes

infection urinaire, communautés bactériennes intracellulaires, pathogénicité E coli Infection urinaire L’infection urinaire est l’infection bactérienne la plus fréquente chez les enfants Le risque de souffrir d’une infection urinaire est de% -% chez les filles et% -% chez les garçons jusqu’à l’âge est le principal facteur de risque pour le développement de la cicatrisation rénale, l’hypertension artérielle et l’insuffisance rénale et est un marqueur des anomalies morphologiques ou fonctionnelles des voies urinaires Le développement de l’UTI dépend des caractéristiques du micro-organisme et des facteurs liés à l’hôte En fait, les exigences de la présence de gènes de virulence dans les UPEC uropathogènes d’Escherichia coli sont déterminées par le contexte génétique de l’hôte et les conditions anatomiques et fonctionnelles des voies urinairesEscherichia coli est l’agent étiologique étiologique le plus commun, responsable de% -% des cas Basé sur le contenu génétique de la souche, E coli présente des groupes phylogénétiques nommés A, B, B et D En général, extraintestinal E c oli et principalement les souches UPEC appartiennent au groupe B et moins fréquemment au groupe D, alors que les souches du microbiote intestinal appartiennent aux groupes A et B La capacité de E. coli à produire des infections urinaires dépend en partie de la présence de différents facteurs de virulence adhésines, capsules, sidérophores et toxines, entre autres La présence de ≥ des gènes de facteurs de virulence suivants définirait les souches comme UPEC: papA, codage papC pour P pili, sfa / focDE S et Dra fimbriae, afa / draBC afimbrial adhésine, iutA sidérophore aérobactine et capsule kpsMT II type II Deux mécanismes pathogènes permettent aux microorganismes d’atteindre les voies urinaires: la voie ascendante, la plus fréquente, dans laquelle les micro-organismes du microbiote intestinal colonisent l’espace péri-urétral et montent l’urètre vers la vessie et éventuellement les reins, et la voie hématogène Dans la vessie, E coli adhère à l’uroépithélium au moyen de fimbriae, déclenchant une réponse inflammatoire . De nouveaux aperçus de la pathogénie d’E. coli UTI ont émergé des modèles UTI chez la souris et plus récemment chez l’homme décrivent la présence de GRV de communautés bactériennes intracellulaires dans l’épithélium vésical Plusieurs modèles in vivo et in vitro ont démontré que E. coli pouvait envahir les cellules urothéliales superficielles dans les premiers stades de l’infection et ensuite se multiplier rapidement dans leur intérieur Cela apporte des changements phénotypiques dans les bactéries qui conduisent à l’établissement d’un GRV, et l’évolution à travers différentes étapes se terminant par la formation de structures similaires aux biofilms. , E coli pourrait échapper à la réponse immunitaire et résister à des traitements antibiotiques avec une pénétration intracellulaire rare Les bactéries intracellulaires IB pourraient émerger de ces réservoirs, adoptant généralement une morphologie filamenteuse et finalement initier un nouveau cycle IBC [,,,] les neutrophiles semblent perdre de l’activité au contact de ces filaments Récemment, Schwartz et al ont décrit que l’augmentation de la formation de GRV au stade aigu de l’IU était associée à une cystite chronique Bien que ces résultats aient été trouvés dans un modèle murin, peu de rapports démontrent la présence de bactéries IBC et filamenteuses dans l’urine de femmes et d’enfants En relation avec l’hôte, les facteurs de risque associés à l’infection urinaire sont les suivantes: sexe féminin, reflux vésico-urétéral, non-circoncision, stade d’apprentissage du contrôle du sphincter, dysfonction mictionnelle, uropathie obstructive, instrumentation urétrale et constipation, entre autres Hsieh et collaborateurs Le taux de% d’anomalies urologiques parmi les enfants hospitalisés avec UTI, étant VUR le plus commun En Uruguay,% des enfants entre et les années d’âge qui ont été hospitalisés en raison d’IVU ont présenté avec VUR Cependant, la plupart des enfants avec UTI n’ont pas tout défaut fonctionnel ou anatomique sous-jacent L’immunité innée plutôt qu’adaptative est essentielle pour la clairance bactérienne au cours des modifications génitales La fonction réceptrice de type Toll est associée à une colonisation bactérienne à long terme et à une bactériurie asymptomatique, tandis que les polymorphismes réduisant l’expression du facteur régulateur de l’interféron ou du récepteur des motifs chimiokines CXC sont associés à une pyélonéphrite aiguë et à un risque accru de cicatrices rénales. UTI se produit, entre% et% des enfants présenteront des récidives dans les mois suivants VUR est présent dans% -% des enfants avec UTI récurrente et est considéré comme le facteur de risque le plus important La présence de GRV pourrait être la base d’un nouveau modèle pathogène UTI récurrent L’objectif de cette étude était de déterminer la présence de IB chez les enfants atteints d’EI coli UTI, de caractériser les attributs de virulence des souches E coli, et d’analyser la relation entre IB et le devenir clinique des patients, en particulier avec UTI récurrente

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Les enfants avec E coli UTI qui ont été vus à l’hôpital pédiatrique, Centro Hospitalario Pereira Rossell, entre Juin et Novembre ont été inclus échantillons d’urine qui ont fourni une croissance significative E coli ont été traitées pour la détection de l’IB Cette étude a été approuvée par le Comité d’éthique de Facultad de Medicina Universidad de la República Uruguay Exp No –

Détection des bactéries intracellulaires

Des échantillons de μL- mL d’urine ont été cytocentrifugés pendant quelques minutes à tpm sur des lames de verre. Les échantillons ont ensuite été fixés à la chaleur et colorés selon la méthode de Wright-Giemsa et fixés au formol pour immunofluorescence. Les échantillons ont été analysés par microscopie optique. avec des images suggérant IB ou bactéries filamenteuses comme décrit par Rosen et al La confirmation de IB a été faite par microscopie confocale à balayage laser recherchant la présence de bactéries dans les cellules épithéliales desquamées dans l’urine IBC a été définie quand ≥ groupes bactériens ont été trouvés à l’intérieur cellulaire, la coloration par immunofluorescence a été réalisée selon le protocole précédemment publié en utilisant des anticorps anti-E coli spécifiques de lapin couplés à l’isothiocyanate de fluorescéine Abcam, aux anticorps anti-uroplakine III UPIII, aux anticorps primaires biotechnologiques Santa Cruz et à l’antiglobuline A les lames de sondes moléculaires de l’anticorps secondaire ont été fixées avec% de paraformaldehyde pendant minutes Après lavage avec du PBS salin tamponné au phosphate, UPIII / coloration a été réalisée pendant minutes puis perméabilisation cellulaire a été réalisée Après minutes, les lames ont été lavées et incubées avec l’anticorps E coli / et l’Uroplakine III / heure à température ambiante. les échantillons ont été lavés avec du PBS et incubés avec un anticorps antigoat d’âne: pendant quelques minutes. Une fois la coloration terminée, les lames ont été montées avec un ul de Citi fl uor. L’acquisition et le traitement des empilements d’images -D ont été effectués comme décrit précédemment. longueur d’onde d’émission La taille d’étape d’acquisition était de μm dans l’axe z et de × pixels dans le plan xy avec une taille de pixel de nm La pile d’image -D a été déconvoluée à l’aide du logiciel Huygens et a été reconstruite avec PerkinElmer. Tous les échantillons d’urine ont été analysés par microscopie confocale

Caractérisation des souches d’E. Coli

Les gènes phylogénétiques d’Escherichia coli A, B, B et D ont été déterminés par amplification en chaîne par polymérase multiplex PCR selon Clermont et al Les gènes du facteur de virulence ont été détectés par PCR multiplexe. papA P pili, bp, papC P pili, bp, sfa / focDE S et Dra fimbriae, bp, afa / draBC adhésine épidermique, bp, iutA sidérophore aérobactine, bp, et kpsMT II capsule de type II, bp Ces isolats qui ont montré ≥ de ces gènes de facteurs de virulence ont été considérés UPEC Cinq autres tests de PCR multiplex pour détecter d’autres facteurs de virulence ont été réalisés selon Johnson et Stell sur des souches UPEC : îlot de pathogénicité PAI, bp, pili type fimH, bp, capsule kpsMT III type III, bp, papEF P pili, bp, ibéA invasin, bp, fyuA sidérophore, bp, papG alel III P pili, bp, K capsule, bp, hlyA hémolysine A, bp, gène rfc impliqué dans la synthèse de l’antigène O, bp, nfaE nonfimbrial adhésine, pb, cvaC colicina V, pb, focG FC fimbriae, pb, survie au sérum de trat, pb, allèle papG II pili bp, allèle papG II et III p pili bp, toxine cnf, pb, sfaS S fimbriae, pb, et capsule k, pb

Caractéristiques cliniques des patients atteints d’E. Coli UTI

Les données cliniques des patients avec et sans IB ont été collectées rétrospectivement par révision des dossiers médicaux Les variables collectées étaient l’âge, le sexe, les symptômes et les signes, les résultats des examens urinaires, s’il s’agissait du premier épisode d’IVU ou de récurrence et la présence d’anomalies morphologiques ou fonctionnelles. les voies urinaires

Analyses statistiques

L’association entre les caractéristiques cliniques des patients, la récurrence des infections urinaires, le groupe phylogénétique et les facteurs de virulence avec la présence de IB a été analysée Les variables numériques ont été exprimées en écart-type. Le test or ou le test exact de Fisher ont été appliqués aux variables nominales. ont été considérés comme significatifs Rapports de cotes Les OR ont été calculés avec le pourcentage d’IC ​​de confiance Les analyses statistiques ont été effectuées à l’aide du logiciel SPSS IBM SPSS Inc, Chicago, Illinois

RÉSULTATS

Cent trente-trois enfants avec une infection urinaire ont été inclus dans l’étude Soixante-quatorze dossiers cliniques ont été analysés, tandis que les autres n’ont pas été inclus en raison de données cliniques incomplètes

Caractéristiques cliniques des enfants atteints d’une infection urinaire

L’âge moyen était des années, allant de mois en années; étaient des femmes% La fièvre était la présentation clinique la plus fréquente, observée dans les cas%; Vingt patients présentaient des symptômes du bas appareil urinaire.% D’autres symptômes étaient des douleurs abdominales, des vomissements, des urines fétides et des diarrhées, toutes associées à de la fièvre et / ou des symptômes des voies urinaires inférieures. présenté un faible gain de poids comme le seul signe Vingt-huit patients% ont montré au moins un épisode antérieur d’UTI, et seulement d’entre eux présentés avec un double tractus excréteur ou VUR

Caractérisation de la souche E coli

La distribution d’Escherichia coli entre les groupes phylogénétiques était la suivante: les souches appartenaient aux groupes B et D et parmi celles-ci, parmi celles-ci appartenaient au groupe D et au groupe B Concernant le reste des souches, étaient incluses dans le groupe A% et dans le groupe B % Cent six souches% étaient considérées comme des UPEC selon la détection de ≥ facteurs de virulence après le PCR de sélection, et appartenaient aux groupes B ou DP = De souches non-UPEC, appartenaient au groupe phylogénétique D%, à A% , B% et B% Tableau montre la fréquence des facteurs de virulence les plus importants détectés dans les souches UPEC et non-UPEC et leur association avec la présence de IB Tous les gènes du facteur de virulence inclus dans la PCR de dépistage étaient statistiquement absents souches non-UPEC afa / draBC: OR, [% CI, -], P =; sfa / focDE: OR, [% CI, -], P =; kpsMTII: OR, [% CI, -], P =; papA: OR, [% CI, -], P =; papC: OR, [% CI, -], P =; iutA: OR, [% CI, -], P =

Fréquences de tableau des principaux facteurs de virulence détectés dans les souches ESEC et non-UPEC uropathogènes Escherichia coli selon la présence de communautés bactériennes intracellulaires / bactéries intracellulaires Facteurs de virulence souches UPEC n = souches non UPEC n = IBC / IIB, non% n = aucun IBC / IIB, Non% n = Total, Non% n = P Valeur IBC / IIB, Non% n = Non IBC / IIB, Non% n = Total, Non% n = P Valeur Facteurs de virulence du gène de dépistage papA papC iutA kpsMTII afa / draBC … sfa / focDE … fimH papGII fyuA papEf papG II-III traT Virulence Facteur Gènes souches UPEC n = souches non UPEC n = IBC / IIB, non% n = non IBC / IIB, non% n = total, non% n = P Valeur IBC / IIB, Non% n = Non IBC / IIB, Non% n = Total, No% n = P Valeur Facteurs de virulence du gène de criblage papA papC iutA kpsMtiI afa / draBC … sfa / focDE … fimH papGII fyuA papEf papG II-III traT Le test was a été appliqué aux variables nominales P & lt; a été considéré comme significatif. Abréviations: IBC, communautés bactériennes intracellulaires; IIB, bactéries intracellulaires isolées; UPEC, Escherichia coli View uropathogène Large

Association des bactéries intracellulaires avec les facteurs de virulence et les caractéristiques cliniques des enfants avec UTI

Dans des échantillons d’urine, la présence d’IB a été suspectée après analyse microscopique optique ménopause. La présence de cellules colorées sombres contenant ce qui semblait être IB a été observée, et dans l’autre la présence de bactéries filamenteuses avec ou sans cellules évocatrices de IB ont été identifiés Figure

Figure Vue grandDownload slideFilamentous bacteries and exfoliées cellules urothéliales dans les échantillons d’urine suspectes pour les communautés bactériennes intracellulaires / bactéries intracellulaires isolées par microscopie optique Images microscopiques lumineuses des cellules uroépithéliales exfoliées colorées avec Wright-Giemsa A, cellules urothéliales détachées et bactéries filamenteuses B et C, colorées en noir cellules avec des GRV suspects Barre d’échelle = μm Abréviation: GRV, communautés bactériennes intracellulairesFigure View largeTélécharger lameBactéries filamenteuses et cellules urothéliales exfoliées dans des échantillons d’urine suspectes de communautés bactériennes intracellulaires / bactéries intracellulaires isolées par microscopie optique Images microscopiques lumineuses de cellules uroépithéliales exfoliées colorées avec Wright-Giemsa A, cellules urothéliales détachées et bactéries filamenteuses B et C, cellules colorées en noir avec des GRV suspects Barre d’échelle = μm Abréviation: GRV, communautés bactériennes intracellulaires Les bactéries intracellulaires ont été détectées par microscopie confocale dans % échantillons, apparaissant sous différentes formes: GRV dans les cas et comme bactéries intracellulaires isolées IIB dans l’autre Figure et Vidéo supplémentaire Considérant les échantillons avec GRV / IIB détectés par microscopie confocale, seuls d’entre eux présentaient des bactéries filamenteuses%

Figure Vue largeDétection des communautés bactériennes intracellulaires GRV / bactéries intracellulaires IB par microscopie confocale à balayage laser dans des cellules urothéliales exfoliées dans l’urine d’enfants atteints d’infection urinaire à Escherichia coli Images microscopiques confocales à balayage laser de cellules uroépithéliales exfoliées colorées avec des protéines primaires uroplakine III cellules épithéliales de la vessie en rouge, Alexa Fluor âne antigoat Immunoglobuline G anticorps secondaire, et des anticorps spécifiques pour E coli vert Barre d’échelle = μm A, isolé IB B, petits IBCs, IBCsFigure Voir grandDownload slideDétection des communautés bactériennes intracellulaires GRV / bactéries intracellulaires IB par microscopie confocale à balayage laser dans des cellules urothéliales exfoliées dans l’urine d’enfants atteints d’une infection urinaire à Escherichia coli Images microscopiques à balayage laser confocale de cellules uroépithéliales exfoliées colorées avec des anticorps primaires uroplakine III protéine structurale de l’épithélium vésical l cellules en rouge, Alexa Fluor âne antigoat immunoglobuline G anticorps secondaire, et des anticorps spécifiques pour E coli vert Barre d’échelle = μm A, IB B isolé, petits GRV C, GRVComparer les résultats entre la lumière et la microscopie confocale, coïncidence a été observée uniquement dans les échantillons , avec IBC / IIB et sans IBC / IIB Vingt-quatre cas de GRV / IIB n’ont pas été détectés par microscopie optique. Quinze des souches avec IBC / IIB cataloguées comme non-UPEC% ont été trouvées au niveau intracellulaire P = Au sein du groupe UPEC, l’un des facteurs de virulence évalués était statistiquement associé à la présence de GRV et / ou IIB, alors que dans le groupe non-UPEC, kpsMTII était associé à la présence de GRV / IIB Tableau Les données cliniques des patients ont été analysées, y compris avec les GRV / Cas d’IIB et sans contrôles IBC / IIB Les caractéristiques cliniques et de laboratoire des patients se sont révélées être liées à la présence ou à l’absence de GRV / IIB et à la présence ou à l’absence de bactéries filamenteuses Tableau

Tableau Caractéristiques cliniques des patients liés à la présence ou à l’absence de communautés bactériennes intracellulaires / Bactéries intracellulaires et bactéries filamenteuses Caractéristique Aucun GRV / IB n = IBC / IB n = P Valeur IBCs n = P Valeur IB n = P Valeur Nonfilamentous n = Filamentous n = P Valeur Féminin sexuel Fièvre ≥ ° C Inférieur Symptômes UTI Récurrent UTI Infection récurrente sans anomalies des voies urinaires Anomalies des voies urinaires Nitrites Leucocytes Caractéristique Aucune IBC / IB n = IBC / IB n = P Valeur IBC n = P Valeur IB n = P Valeur Nonfilamentous n = Filamentous n = P Valeur Sexe féminin Fièvre ≥ ° C Inférieure Symptômes d’IU Recurrent IU Recurrent IU sans anomalie des voies urinaires Anomalies des voies urinaires Nitrites Leucocytes Abréviations: IB, bactéries intracellulaires; GRV, communautés bactériennes intracellulaires; Infection des voies urinaires View LargeLa présence d’IIB et / ou de GRV était statistiquement associée à une récidive d’infection urinaire OR, [% CI, -], P =, avec un risque plus élevé si le patient ne présentait pas de troubles morphologiques ou fonctionnels des voies urinaires. [% IC, -], P = La formation de GRV était statistiquement associée à la présence de symptômes du bas appareil urinaire OU, [% CI, -], P = et absence de fièvre P = IIB ne présentait aucune corrélation avec les symptômes cliniques Aucune association avec une présentation clinique ou une récurrence a été observée lorsque des bactéries filamenteuses ont été détectées

DISCUSSION

ases, c’était le premier épisode d’UTI; Étant donné que les dossiers cliniques ont été analysés rétrospectivement, nous n’avons pas pu établir si l’un de ces patients a développé une nouvelle infection urinaire. Des études cas-témoins prospectives seraient nécessaires pour établir le rôle de l’IB dans les infections urinaires récurrentes. observable le long du cycle de génération du GRV Au cours des premières heures suivant l’infection, une seule bactérie envahit l’urothélium et se réplique, formant des GRV précoces de cellules en forme de bâtonnets dans des colonies vaguement organisées. Au bout de l’IBC, les bactéries se différencient en cellules en forme de bâtonnets et commencent à se détacher des GRV. Ces bactéries peuvent s’échapper de la cellule épithéliale superficielle et amorcer un nouveau cycle de formation des GRV, ou être expulsé de l’hôte par la miction Dans cette étude, différentes formes de IIB ont été décrites: IIB ou IBC Les deux formes nous Ces formes pourraient être différentes étapes du même processus, IIB correspondant probablement aux stades initiaux de la formation de GRV Figure A Comme observé sur les figures B et C, les bactéries ont une petite taille et une forme coccoïde compatible avec les observations de les IBCs midstage dans le modèle de souris Après les stades tardifs dans la formation de IBC, des bactéries filamenteuses sont observées sur la surface luminale de la vessie UPEC filamenteuse pourrait être associée à une plus grande capacité d’attachement aux cellules urothéliales points, expliquant la difficulté apparente rencontrée par les phagocytes dans les déflecteurs et la résistance bactérienne contre les fortes forces de cisaillement [,,] Peu d’études ont cherché la présence de GRV dans les cellules urothéliales exfoliées chez l’homme Rosen et al ont trouvé une corrélation significative et la microscopie confocale pour la détection des GRV; cependant, ils ont effectué la microscopie confocale seulement dans les échantillons d’urine positifs par microscopie optique Dans cette étude, nous avons cherché la présence de GRV par microscopie confocale dans tous les échantillons d’urine, permettant la détection de presque% de GRV / IIB microscopie optique, principalement en raison de la présence de IIBAlien Rosen et al ont décrit la présence de bactéries filamenteuses dans% des échantillons avec des GRV , dans notre étude filamentation a été observée juste en% des échantillons d’urine avec GRV / IIB Cela peut être parce que À cet égard, Andersen et ses collaborateurs ont observé que l’inversion du filament commençait de quelques minutes à une heure après la récolte et se poursuivait pendant les heures suivantes [ ] Dans notre étude, des échantillons d’urine ont été traités pour l’analyse de microscopie entre et heures après la miction; Ainsi, les formes filamenteuses auraient pu revenir à des bactéries en forme de bâtonnets. Il est intéressant de noter que les souches détectées intracellulairement ne sont pas classées UPEC selon les définitions classiques basées sur la présence de certains facteurs de virulence et groupes phylogénétiques Considérant seulement la présence de virulence Ces isolats pourraient être considérés comme des colonisateurs. Cependant, ces bactéries étaient intracellulaires, détectées dans les cellules de la vessie et associées à des infections urinaires récurrentes. Ainsi, la définition de l’UPEC selon la présence de certains facteurs de virulence sous-estimerait un groupe d’E. Cela pourrait refléter probablement la diversité de l’UPEC. La plupart des recommandations thérapeutiques pour les enfants recommandent l’utilisation de β-lactamines pour les traitements empiriques. Toutefois, ces antibiotiques atteignent de faibles concentrations intracellulaires, il serait donc nécessaire de fournir un plan thérapeutique alternatif aux patients. avec UTI récurrente sans anatomique ou fonctionnel Blango et al. ont découvert que seuls quelques antibiotiques, y compris la nitrofurantoïne, la cipro fl oxacine et la spar fl oxacine, étaient capables d’éliminer l’IB dans les dosages basés sur la culture cellulaire de la vessie. Cependant, chez une souris, une infection urinaire pouvait survenir. Les nouvelles études dans des modèles de souris proposent l’utilisation de différents agents pour expulser les bactéries du chitosan cellulaire comme un exfoliant de la vessie qui, en association avec des antibiotiques, éradiquerait les réservoirs intracellulaires. ou le sulfate de protamine, une protéine hautement cationique qui élimine UPEC lié et intracellulaire, provoquant l’exfoliation des cellules parapluie Traitement à la forskoline, un médicament qui augmente les niveaux intracellulaires d’adénosine monophosphate cyclique, expulse UPEC du réservoir intracellulaire, rendant les bactéries sensibles aux réponses et antibiotiques Les études prospectives impliquant la recherche clinique et fondamentale être nécessaire d’élucider l’importance des différentes stratégies thérapeutiques pour éradiquer l’IB dans les infections urinaires récurrentes chez l’homme

Remarques

Remerciements Les auteurs remercient le Dr S Härtel et Carmen Gloria Lemos de ScianLab, Santiago, Chili, pour l’aide apportée au soutien financier. Ce travail a été soutenu par l’Agencia Nacional de Investigación e Innovación de LR et la Comisión Sectorial de Investigación Científica de R VPos conflits potentiels de intérêt Tous les auteurs: Aucun conflit d’intérêt potentielTous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués